《细胞生物学实验》教学大纲
一、实验目的与要求:
细胞生物学实验是生物学所有专业的一门专业基础课程,是一门独立的实验课程,同时也是为了配合细胞生物学的教学而开设的一门实验课程,本课程由演示性、验证性、操作性和综合性等多层次实验内容构成,目的在于巩固和加深学生对细胞生物学知识的理解、验证细胞生物学学理论、并初步掌握细胞生物学研究所必需的基本实验技术。在此基础上,进行一定比例的综合性、设计性实验,将实验理论和实验技能融为一体,从而培养学生的基本实验思想、实验方法、实验技能和综合应用能力。
本实验课中的验证性实验主要通过老师示教后由学生完成,综合实验在教师指导下由学生自己动手完成,同时,要求学生根据所掌握的理论基础和实验技能,自行设计实验,经教师认可后独立完成实验操作,并撰写研究报告。
二、实验项目与提要:
序号 | 实验项目 | 必做 选做 | 时数 | 内 容 提 要 | 实验 类型 | 每套仪 器人数 |
1 | 特殊光学显微镜的结构、工作原理及其使用 | 必做 | 3 | 1、四种特殊光学显微镜特殊部件的构造及调节 2、四种特殊光学显微镜的使用及注意事项 3、四种特殊光学显微镜的用途 4、学生使用四种特殊光学显微镜 | 验证性 | 6 |
2 | DNA的原位显示—福尔根染色 | 必做 | 3 | 1、取洋葱根尖于小烧杯中用1N盐酸60℃水浴中水解8分钟 2、用蒸馏水洗去盐酸 3、Schiff液染色30分钟 4、用新配制的亚硫酸氢钾洗3次,直至出现红色 5、用蒸馏水洗5分钟 6、滴4.5%醋酸于载玻片,将根尖放于其中压片 7、镜检 | 验证性 | 2 |
3 | 细胞内过氧化物酶的显示 | 必做 | 3 | 1、处死小白鼠取股骨,用微量注射器吹出骨髓细胞于载玻片上,涂片,晾干 2、0.5%硫酸铜中固定30秒 3、冲洗 4、0.2%联苯胺中氧化3分钟 5、冲洗 6、1%番红染色1分钟 7、冲洗,晾干 8、镜检 | 验证性 | 2 |
4 | 细胞融合实验 | 必做 | 3 | 1、鸡红细胞悬液的制备 2、离心洗涤3后加入3毫升GKN溶液 3、计数,稀释至每毫升15万个 4、取1毫升上述悬液加2毫升50%PEG,混匀 5、30℃水浴中30分钟 6、镜检 | 验证性 | 2 |
5 | 细胞膜的通透性观察 | 必做 | 3 | 1、10%兔血红细胞的制备 2、溶血现象的观察 3、观察兔血红细胞对各种物质的通透性(氯化钠溶液、氯化铵溶液、葡萄糖、硝酸钠、乙醇、草酸铵) | 验证性 | 6 |
6 | 细胞凝集反应 | 必做 | 3 | 1、取材:去皮土豆 2、凝集素粗提液制备 3、鸡和兔红细胞悬液制备 4、凝集素粗提液与鸡和兔红细胞悬液各一滴,20分钟 5、镜检 | 验证性 | 2 |
7 | 线粒体的超活染色与观察( | 必做 | 3 | 1、取材:洋葱鳞茎内皮细胞: 2、染色:詹纳斯绿染色 3、制片 4、镜检 | 验证性 | 1 |
8 | 细胞器的分离与观察 | 必做 | 3 | 1、制备鼠肝细胞匀浆 2、差速离心 3、分离物鉴定 | 验证性 | 4 |
9 | 细胞骨架的显示观察 | 必做 | 3 | 取材:洋葱鳞茎内皮细胞入PBS液中处理5分钟 2、抽提:吸去PBS,用曲通100于37℃水浴处理30分钟 3、冲洗:吸去曲通,用缓冲液洗3次,每次5分钟 5、固定:3%戊二醛固定20分钟 6、冲洗:弃戊二醛后,用PBS液洗3次,每次5分钟 7、染色:吸去PBS,用0.2%考马斯亮蓝染色10分钟 8、制片:倒去染液,用蒸馏水洗3次,铺展开,加盖玻片 9、镜检 | 验证性 | 1 |
10 | 联会复合体的染色和观察 | 必做 | 3 | 1、处死小鼠,取睾丸 2、剪开白膜,剪碎曲细精管并轻轻吹打 3、低渗1小时 4、低渗终止前10分钟加福尔马林 5、离心 6、固定 7、滴冰片 8、银染 9、镜检 | 验证性 | 2 |
11 | 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动过程观察 | 必做 | 6 | 1、免疫小白鼠 2、4-6天后注射鸡红细胞 3、20-30分钟处死小白鼠,取腹腔掖 4、计数与稀释 5、涂片 6、固定 7、染色 8、镜检 | 验证性 | 2 |
12 | 小鼠骨髓细胞的微核诱导 | 选做 | 9 | 根据细胞生物学理论课所学知识,就该课题设计出实验方案,锻炼学生的动手、动脑能力 | 综合设计性 | 6 |
13 | 动物外周血淋巴细胞染色体制备 | 选做 | 9 | 根据细胞生物学理论课所学知识,就该实验课题设计出实验方案,锻炼学生的动手、动脑能力 | 综合设计性 | 6 |
三、成绩考核方法:
1.平时成绩20%:包括出勤+课堂提问
2.实验成绩40%:包括实验操作+实验报告+实验结果+综合设计性实验
3.试卷成绩40%:期末考试成绩
4.综合考核成绩的计算:平时成绩20%+实验成绩40%+试卷成绩40%
四、教材及主要参考书:
《细胞生物学实验》杨汉民主编高等教育出版社 1997
《细胞生物学实验》辛华主编科学出版社 2001
《细胞生物学实验指导》李素文主编高等教育出版社施普林格出版社2001
《细胞生物学实验教程》王金发等主编科学出版社 2004
《细胞生物学与遗传学实验指导》金龙金浙江大学出版社 2005
撰写人: 张艳华 审核人:张子峰